Muss bei der Lagerung die empfohlene Temperatur eingehalten werden?

• ELISA- und Western-Blot-Kits müssen stets bei 2–8 °C gelagert werden.
• Ein eingefrorenes Kit darf nicht verwendet werden.
• Vermeiden Sie bei der Lagerung der Kits den Einsatz von Geräten mit automatischer Abtauung, die Temperaturschwankungen verursachen.

Sind die Komponenten der Kits austauschbar?

• Verwenden Sie ausschließlich Komponenten aus ein und demselben Paket, sofern in der Anleitung nicht anders angegeben.
• Mischen Sie keine Reagenzien aus verschiedenen Chargen oder von verschiedenen Herstellern.
• Legen Sie nach jedem Test alle Komponenten wieder in die Originalverpackung zurück. Dadurch wird die Vermischung von Komponenten verschiedener Chargen und Hersteller vermieden.

Kann die Laborumgebung die Testergebnisse beeinflussen?

• Ein Kit muss vor der Verwendung auf Raumtemperatur gebracht werden. Bei unzureichender oder zu plötzlicher Erwärmung kommt es zu einer erheblichen Verschiebung der Messwerte, sodass die Ergebnisse womöglich nicht aussagekräftig sind.
• Führen Sie den Test nach Möglichkeit in Räumen mit normaler Labortemperatur (20-25 °C) durch. Höhere oder niedrigere Temperaturen beeinflussen die Testergebnisse.
• Nicht in Gegenwart reaktiver Dämpfe (Säuren, Laugen, Aldehyde) oder in staubiger Umgebung testen. Solche Verunreinigungen können die enzymatische Aktivität des Konjugats beeinträchtigen.

Wie sollten meine Proben auf die Testung vorbereitet werden?

• Vor der Verwendung müssen alle Proben auf Raumtemperatur gebracht und gut gemischt werden. Aufgrund der niedrigen Lagertemperaturen sind die Konzentrationen am Boden und an der Oberfläche der Lösungen sehr unterschiedlich. Inhomogene Proben können zu falsch positiven oder negativen Reaktionen führen.
• Proben, die sichtbare Partikel enthalten, müssen vor der Testung langsam zentrifugiert werden.
• Verwenden Sie immer frisch verdünnte Proben. Bei der erneuten Testung von Proben sollten diese neu verdünnt werden.

Kann die Beschaffenheit der Probe das Testergebnis beeinflussen?

• Bakteriell kontaminierte, hämolytische, chylushaltige oder gerinnungshemmende Plasmaproben (außer Citrat) können die Testergebnisse beeinflussen. Die Hitzeinaktivierung des Serums (Plasmas) kann zu ungenauen Ergebnissen führen.
• Gut verschlossene Proben können 1 Woche lang bei 2–8 °C gelagert werden. Bei längerer Lagerung müssen die Proben bei -20 °C in fest verschlossenen Behältern (z. B. Eppendorf) aufbewahrt werden. Ein wiederholtes Auftauen wird nicht empfohlen, da dies zu ungenauen Ergebnissen führen kann.
  Was sind die kritischen Punkte bei der Arbeit mit den einzelnen Komponenten des Kits?
  Werkzeuge
•  Verwenden Sie für die Zubereitung und Verwendung von Reagenzien stets saubere Geräte, vorzugsweise Einweggeräte. Jede Verunreinigung kann zu verfälschten Ergebnissen führen.
• Verwenden Sie niemals denselben Behälter (Schale) für die gleichzeitige Zubereitung oder Pipettierung von Reagenzien. Verwenden Sie für Reagenzien keine Behälter mit Metalldeckeln.
• Verwenden Sie für die Herstellung der Arbeitsverdünnungen nur destilliertes Wasser aus hochwertigen Destillierapparaten, das nicht durch Metallionen aus den Elektroden verunreinigt ist.
• Für die Zubereitung der Arbeitslösungen müssen saubere, mit deionisiertem (destilliertem) Wasser gespülte Gefäße oder Einmalartikel verwendet werden.

Mikroplatte

• Bringen Sie den Beutel mit der Platte vor dem Öffnen auf Raumtemperatur, um die Bildung von Kondenswasser durch feuchte Luft zu vermeiden. Die übrigen unbenutzten Streifen sollten immer zusammen mit einem Trockenmittel in den Beutel aus der Originalverpackung zurückgelegt und hermetisch verschlossen werden.  Vor Feuchtigkeit schützen.
• Antigen-beschichtete Mikroplattenstreifen können nur einmal verwendet werden.
• Beachten Sie die Markierungen für jeden Streifensatz, um Verwechslungen zu vermeiden.
• Berühren Sie beim Waschen und Pipettieren nicht die Innenfläche der Mikroplattenvertiefungen, da dies das gebundene Antigen beschädigen kann.

Regeln für die Handhabung der Lösungen

• Alle Reagenzien müssen vor Gebrauch gut gemischt werden. Aufgrund der niedrigen Lagertemperaturen ist die Konzentration der Lösung oben und unten sehr unterschiedlich. Klopfen Sie die Böden der Fläschchen vor Gebrauch gegen eine harte Oberfläche, um eventuelle Lösungsreste auf dem Deckel zu entfernen.
• Verschließen Sie alle Reagenzienflaschen sofort nach Gebrauch, um eine Verdunstung und Verunreinigung des Inhalts zu vermeiden.
• Verwechseln Sie die Deckel der Reagenzien nicht. Vermeiden Sie eine Kreuzkontamination der Reagenzien. Dies kann zu ihrer gegenseitigen Zersetzung führen.
• Geben Sie keine Reagenzienreste in die Fläschchen zurück, da dies zu einer Zersetzung des restlichen Inhalts führen könnte.

Lösungen

• Die lichtempfindlichen Reagenzien (TMB - Complete) müssen vor direkter Sonneneinstrahlung geschützt werden.
• Die TMB-Lösung sollte farblos (oder möglicherweise leicht bläulich) sein. Ist sie tiefblau, deutet dies auf eine Zersetzung hin und die Lösung sollte nicht für den Test verwendet werden.
• Wenn ein Test Kontrollen mit Arbeitsverdünnung enthält, ist von einer weiteren Verdünnung abzusehen.
• In jedem Testdurchlauf müssen Kontrollen enthalten sein. Nur so lässt sich feststellen, ob der Test ordnungsgemäß durchgeführt wurde oder nicht.

Was ist vor dem Pipettieren zu prüfen?

• Zum Pipettieren dürfen nur geeichte und validierte Werkzeuge verwendet werden, die eine gute Reproduzierbarkeit der Ergebnisse gewährleisten. Geringe Mengen an Reagenzien im Test führen zu fehlerhaften und abnormalen Ergebnissen.
• Überprüfen Sie vor der Testdurchführung die Volumeneinstellungen der Pipetten. Geben Sie immer nur die angegebene Reagenzienmenge hinzu.
• Stellen Sie vor dem Pipettieren in die Mikroplatte sicher, dass die Streifen gut am Rahmen haften. Es besteht die Gefahr des Umkippens, was zu einer Beschädigung der Scheibe oder des Photometers führen kann.
• Überprüfen Sie vor dem Pipettieren das Etikett auf dem Fläschchen, um eine unnötige Verwechslung von Komponenten zu vermeiden.

Welchen Einfluss hat die Pipettiertechnik auf die Testergebnisse?

• Achten Sie beim Pipettieren der Proben immer darauf, die Spitzen zu wechseln, um eine Kreuzkontamination und eine Verunreinigung des Tests zu vermeiden
• Pipettieren Sie alle aufeinanderfolgenden Reagenzien im gleichen Rhythmus und in der gleichen Reihenfolge in die Vertiefungen, insbesondere bei einer größeren Anzahl von Proben, um standardisierte Ergebnisse zu erzielen.
• Zwei aufeinanderfolgende Proben eines Patienten (gepaarte Seren) müssen immer nebeneinander in einem einzigen Assay untersucht werden.  Nur so lassen sich verlässliche Ergebnisse erzielen.
• Vermeiden Sie eine Kreuzkontamination der übrigen Vertiefungen, wenn Sie Reagenzien in die Vertiefungen einer Mikroplatte pipettieren.
• Die mit Antigenen beschichteten Vertiefungen dürfen während des Tests nicht austrocknen.
• Pipettieren Sie die Reagenzien direkt nach dem Waschen. Sonst besteht die Gefahr, dass die Ergebnisse beeinträchtigt werden.
• Decken Sie die Mikroplatte nach dem Pipettieren der letzten Vertiefung mit einem Deckel ab, stellen Sie sie in einen Thermostaten und aktivieren Sie den Timer. Die strikte Einhaltung der Inkubationszeit ist äußerst wichtig.

Muss die vorgegebene Anzahl an Waschgängen eingehalten werden?

• Halten Sie sich an die vorgesehene Anzahl von Waschgängen und an die vorgeschriebene Vorgangsweise (vollständige Befüllung und Entnahme aus den Vertiefungen). Das ordnungsgemäße Waschen hat einen großen Einfluss auf das Testergebnis.
• Bei Benutzung der Waschmaschine achten Sie bitte darauf, sie nach dem letzten Test gründlich auszuwaschen. Eine andere Lösung im Gerät kann Ihre Ergebnisse beeinflussen. Nach dem Waschen muss die restliche Waschlösung durch Klopfen auf ein saugfähiges Material aus den Vertiefungen entfernt werden. Wird dieser Schritt versäumt, kommt es zu einer Verdünnung des folgenden Reagenzes und zu einer Verfälschung des Ergebnisses.
• Verwenden Sie das korrekte Waschverfahren. Wenn die Entnahme aus den Vertiefungen nicht ordnungsgemäß erfolgt, besteht die Gefahr, dass die Proben verwechselt werden und beim Ausschütteln der Mikroplatte nach der Inkubation ein falsch positives Ergebnis erzielt wird. 
• Waschen Sie die Mikroplatte umgehend nach Ende der Inkubation. Die Verzögerung des Waschvorgangs verlängert die Inkubationszeit, was zu abnormalen Ergebnissen führt.

Was ist der Vorteil einer Inkubation bei 37 °C im Vergleich zu einer Inkubation bei Raumtemperatur?

• Durch die standardisierte Temperatur im Inkubator werden negative Umwelteinflüsse, wie z. B. Schwankungen der Umgebungstemperatur in verschiedenen Jahreszeiten, eliminiert. Höhere oder niedrigere Temperaturen beeinflussen die Messwerte. Die Inkubation bei 37 °C ermöglicht eine kürzere Inkubationszeit, wodurch sich die Gesamtdauer des Tests verkürzt.
• Überprüfen Sie die Temperatureinstellung am Thermostat. Die Temperatur stimmt nicht immer mit dem Wert auf dem LCD-Display des Thermostats überein. Legen Sie keine Platten auf die beheizte Oberfläche des Geräts.
• Entfernen Sie alle Luftblasen aus den Vertiefungen, indem Sie vor der Inkubation im Thermostat vorsichtig auf den Rahmen der Mikroplatte klopfen. Luftblasen verändern das Standardvolumen in den Vertiefungen.
• Decken Sie die Mikroplatte vor der Inkubation immer mit einem Deckel ab, um die Verdunstung der Reagenzien im Inkubator und eine mögliche Kontamination der exponierten Vertiefungen zu verhindern.

Was ist vor der Messung der Absorption zu prüfen?

• Überprüfen Sie die Einstellungen für die Wellenlänge.  
• Prüfen Sie, ob die Unterseite der Vertiefungen trocken und sauber ist. Verwenden Sie ein geeignetes Material, das keine Fasern hinterlässt. Ein verschmutzter Boden der Vertiefung kann zu verfälschten Ergebnissen führen.
• Messen Sie die Farbintensität der Lösungen in den Vertiefungen innerhalb von 30 Minuten nach Beendigung der Reaktion.

Wie gehe ich richtig mit den WB-Streifen um?

• Die Streifen sind relativ zerbrechlich und erfordern eine vorsichtige Handhabung. Öffnen Sie den Beutel und die Laschen mit den Streifen und verwenden Sie anschließend eine Pinzette, um die Streifen vorsichtig im Bereich des Etiketts zu greifen.
• Geben Sie unbenutzte Streifen sofort zurück in den Beutel mit Trockenmittel und verschließen Sie ihn wieder mit dem beiliegenden Dichtungsstreifen, um den Kontakt mit Feuchtigkeit und damit die Zersetzung der Streifen zu verhindern. Vermeiden Sie jeglichen Kontakt mit der Membran.
• Legen Sie die Streifen sofort in die Schalen. Die Streifen müssen während der Erkennung immer mit der Oberseite nach oben in der Schale liegen (d. h. mit der Seite, auf der sich die Startlinie befindet). Diese Streifen müssen vollständig befeuchtet werden.

Welche Möglichkeiten bietet die Validierungsmethode des Westernblot-Tests?

• WB-Streifen enthalten eine so genannte Cut-off-Linie, die zur Kontrolle der Funktionalität und Sensitivität des Kits dient und die Auswertung des Tests erleichtert. Fehlt die Cut-off-Linie, wurde die für die korrekte Durchführung des Tests erforderliche Sensitivität nicht erreicht.
• Verwenden Sie zur zusätzlichen Validierung Positiv- und Negativkontrollen (im Kit und in der Endverdünnung enthalten).
• Die Validität ist gegeben, wenn das endgültige Erscheinungsbild des Streifens nach Verwendung der Positivkontrolle mit dem auf dem Protokoll im Kit abgebildeten Validierungsstreifen übereinstimmt. (Die im Kit enthaltene Positivkontrolle enthält möglicherweise nicht alle spezifischen Linien.) Nach Ende der Reaktion werden die Streifen sofort von den Schalen auf Filterpapier übertragen und getrocknet, um eine Erhöhung des Hintergrunds der Streifen zu vermeiden.
• Werten Sie die Streifen erst aus, wenn sie vollständig getrocknet sind – feuchte und vollständig getrocknete Streifen unterscheiden sich in der Intensität der Farblinien und des Hintergrunds.